Expression and Characterization of Recombinant Protein of J-SU pGEX either by Single or Double Cell Lysis
DOI:
https://doi.org/10.24002/biota.v14i3.2579Keywords:
Protein rekombinan, JSU pGEX, ekspresi, pemecahan selAbstract
Penelitian ini dimaksudkan untuk optimasi produk protein rekombinan Superficial Unit dari virus Jembrana (JSU) yang dieksperikan melalui pemecahan sel secara tunggal dan ganda dengan sistem pGEX dalam skala flask 100ml media kultur. Dua metode pemecahan sel yang digunakan yaitu Freeze and Thaw (FT) sebagai pemecahan tunggal dan gabungan FT dan Sonikasi sebagai pemecahan ganda. Sel inang (E. Coli pembawa konstruk JSU pGEX) ditumbuhkan dengan induksi IPTG pada 37oC dengan pengocok berkecepatan 200rpm sampai mencapai kepadatan sel 0,8. Sel atau pelet dikoleksi dengan sentrifugasi, pelet dipecah dengan 2 perlakuan pemecahan sel tunggal dan ganda. Hasil pemecahan sel disentrifugasi untuk dikoleksi peletnya sebagai inclusion body. Solubilisasi dilakukan terhadap inclusion body dengan solubilisasi buffer dan diperoleh substrat protein JSU kemudian dimurnikan melalui Gluthation sepharose 4B (500μl resin) dengan metode batch capture. Hasil karakterisasi dengan SDS PAGE dan Western Blotting menunjukkan ukuran protein JSU pGEX yang tepat yaitu 60kDa pada kedua sistem pemecahan sel. Namun demikian, pemecahan sel secara tunggal menghasilkan protein murni JSU pGEX lebih besar (0.812ng/ul) dibanding pemecahan sel secara ganda (0.486ng/ul). Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa protein rekombinan JSU pGEX terekspresi lebih baik dengan metode pemecahan sel Freeze and Thaw.
Downloads
Published
How to Cite
Issue
Section
License
Authors who publish with Biota : Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Hayati agree to the following terms:
- Authors retain copyright and grant the Biota : Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Hayati right of first publication. Licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License that allows others to share the work with an acknowledgment of the work's authorship and initial publication in this journal.
- Authors are able to enter into separate, additional contractual arrangements for the non-exclusive distribution of the journal's published version of the work (e.g., post it to an institutional repository or publish it in a book), with an acknowledgment of its initial publication in Biota : Jurnal Ilmiah Ilmu-Ilmu Hayati, and as long as Author is not used for commercial purposes.